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| I.
TÉCNICAS SEROLÓGICAS DEL SARAMPIÓN |
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En
áreas con una baja incidencia del sarampión, el diagnóstico
del sarampión por medio de un cuadro clínico se complica
con frecuencia debido a la naturaleza esporádica de la enfermedad
y a la amplia ocurrencia de otras enfermedades eruptivas. Además,
muchos casos de sarampión en individuos vacunados con anterioridad
o inmunocomprometidas no cumplen con la definición clínica
del caso. Por consiguiente, se debe efectuar la confirmación
de la infección del sarampión usando métodos basados
en pruebas de laboratorio.
La detección de anticuerpos es el método más versátil
y más comúnmente usado para el diagnóstico del
sarampión. En casos de sarampión agudos y sin complicaciones,
un aumento significativo de anticuerpos IgG específicos del sarampión
en especimenes de suero tomados entre la fase aguda y la fase de convalecencia
es generalmente considerado diagnóstico. Una prueba positiva
para anticuerpos específicos IgG en un solo espécimen
de suero es indicativa de una infección anterior con virus del
sarampión o con la vacuna del sarampión, pero no asegura
protección contra la infección o la reinfección.
La detección de anticuerpos específicos IgM en un solo
espécimen de suero tomado dentro de los primeros pocos días
del inicio de la erupción puede proveer un buen diagnóstico
probable de una infección actual o reciente del virus del sarampión.
Por lo tanto, el ensayo IgM es la prueba de elección para el
diagnóstico rápido de los casos de sarampión.
| II.
MANEJO DE ESPECIMENES SEROLÓGICOS |
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Recolección
de la muestra de sangre
La muestra de sangre para la prueba serológica se obtiene por medio
de venepuntura o mediante lanceta en el dedo o en el talón (finger/heel
stick) y transferencia a un tubo separador de suero-gel (serum-gel separator
tube). No congele el tubo antes de retirar el suero. Centrifugue el tubo
para separar el suero del coágulo. Transfiera asépticamente
el suero a un tubo estéril con tapa de enroscado exterior y empaquetadura
con aro de goma (o-ring). Se puede despachar el suero fresco y esterilizado
en un paquete que contenga congelantes (wet ice pack) o a la temperatura
ambiente por un medio de entrega al día siguiente. Se puede enviar
el suero congelado en hielo seco por un medio de entrega de un día
al otro. Se toman en cuenta y se someten a prueba tanto el suero como
los plasmas hemolizados y lipemiados (hemolyzed and lipemic), usualmente
sin interferencias aparentes.
Llegada,
Rastreo y Elaboración de Informes
Se reciben especimenes de suero para las pruebas IgG, IgM y de neutralización
del sarampión en los CDC a través de la Sección de
Manejo de Datos y Especimenes (Data and Specimen Handling Section, DASH
por sus siglas en inglés) provenientes de departamentos de salud
internacionales, estatales y locales, y ocasionalmente de consultorios
médicos que trabajan en estudios especiales o en protocolos de
vacunación con el National Center for Infectious Diseases o el
National Immunization Program y de los laboratorios de referencia de OPS
y OMS. Se debe presentar el formulario DASH debidamente llenado (apéndice:
CDC 50.34 rev 11/92 ) para los especimenes provenientes de los laboratorios
de los departamentos de salud estatales (únicamente de EE.UU.).
Todos los especimenes aceptados deben contar con la aprobación
previa del Dr. William J. Bellini, Chief of the Measles Virus Section.
DASH está a cargo de rastrear los especimenes y de hacer llegar
de vuelta el informe a los departamentos de salud estatales o directamente
a los investigadores principales, o a OPS y OMS. Se mantienen los datos
iniciales en su archivo correspondiente. El informe de todos los resultados
se hace por medio del director del laboratorio.
Almacenamiento
El suero congelado se deja descongelar a la temperatura ambiente o en
el refrigerador de un día para otro inmediatamente antes de someterlo
a prueba. El suero puede mantenerse a + 40C por varios días a fin
de volver a someterlo a prueba antes de devolverlo a - 200C para su almacenamiento
a largo plazo. En la medida en que lo permitan las cantidades, todas las
muestras de suero sometidas a prueba se mantienen en almacenamiento a
largo plazo en el laboratorio de sarampión.
Para
poder asegurar los resultados óptimos de las pruebas, es esencial
que se sigan exactamente todos los procedimientos de pruebas según
se describe en las instrucciones incluidas en el estuche:
- Se deben
preparar de manera idéntica todas las veces las soluciones de
trabajo de los reactivos de ensayo.
- Se deben
observar estrictamente todos los tiempos y temperaturas de incubación.
- Se deben
manejar los reactivos de prueba de la manera prescrita. A fin de reducir
al mínimo los tiempos de congelamiento - descongelamiento y de
evitar la contaminación, use técnicas estériles
para dispensar reactivos en volúmenes pequeños, pero no
volúmenes de menos de 50 ul.
- Los
reactivos liofilizados, especialmente los diluyentes, deben ser reconstituidos
al volumen descrito y mezclados vigorosamente en un mezclador mecánico.
- Señal
alta de interferencia (background).
a. Una señal alta de interferencia en varios pocillos en indica
técnicas de lavado deficientes o contaminación cruzada
de reactivos. Limpie la lavadora y repita la prueba.
b. Altos señalesen todos los pocillos pueden indicar dilución
inadecuada de reactivos o contaminación de reactivos o diluyentes
de prueba. Repita la prueba con productos nuevos.
c. c. Una señal alta en pocillos con los controles de células
no infectadas de una muestra determinada sugiere reacciones de anticuerpos
de suero no identificados con reactivos de prueba. Se puede volver a
someter a prueba el espécimen en una dilución en serie.
-
Se debe
tener cuidado especial para establecer la correspondencia entre los
identificadores de paciente con los tubos de dilución del suero,
con el lugar de los sueros en las placas de ensayo (test plates) junto
con valores O.D. calculados.
-
Se debe
mantener un registro de cada ensayo a medida que se realiza la prueba.
Se debe tomar nota de los reactivos, los números de lote y
las fechas de expiración. Se debe registrar la manera como
se llevan a cabo las diluciones y el tiempo empleado en cada paso.
- Se debe
mantener un registro continuo de todos los valores de control a fin
de monitorear con el tiempo los cambios al efectuarse los ensayos.
| IV.
RESULTADOS E INTERPRETACIÓN |
|
IgM
Result |
IgG
Result |
Previous
Infection
History |
Current
Infection |
Comments |
| + |
+
or - |
not
vaccinated, no
history of measles |
recent
1st MMR |
seroconvert* |
| + |
+
or - |
not
vaccinated, no
history of measles |
wild-type
measles |
seroconvert*,
classic measles |
| + |
+
or - |
Previously
vaccinated, primary vaccine failure |
recent
2nd MMR |
seroconvert* |
| - |
+ |
previously
vaccinated,
IgG+ |
recent
2nd MMR |
IgG
level may stay same or boost |
| + |
+ |
previously
vaccinated,
IgG+ |
wild-type
measles |
may
have few or no symptoms** |
| + |
+ |
recently
vaccinated |
exposed
to
wild-type measles |
cannot
distinguish if vaccine or wild-type, evaluate on epidemiologic grounds*** |
| +
or - |
+ |
distant
history of measles |
wild-type
measles |
may
have few or no symptoms**, if clinically compatible may have been
misdiagnosed initially |
| * |
IgG
response depends on timing of specimen collection (4) |
| ** |
If
so, do not consider contagious unless clinical presentation is consistent
with measles |
| *** |
If
IgM negative, helpful to rule out wild-type measles infection |
- Cremer
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